一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达

作者：严飞; 赵新宇; 邓洪新; 魏于全

来源：生物工程学报, 2007, (03): 423-428.

DOI：10.13345/j.cjb.2007.03.012

• 载体构建
• 绿色荧光蛋白
• 核糖体结合位点 vector construction
• enhanced green fluorescent protein
• internal ribosome entry site

为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译...

• 单位
  四川大学华西医院; 四川大学; 生物治疗国家重点实验室