胡芦巴叶黄酮组分的制备、表征及其对肝细胞氧化损伤的保护作用

作者：王瑞楠; 付洋洋; 铁芳芳; 胡娜; 王洪伦; 何彦峰^*

来源：中国中药杂志, 2022, 47(08): 2178-2186.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20211029.402

• 胡芦巴叶
• 黄酮
• 过氧化氢
• L02细胞
• 氧化应激
• MAPKs/Nrf2/HO-1

研究胡芦巴叶黄酮组分(fenugreek leaf flavonoids, FLFs)中的主要成分及其抗氧化活性。利用溶剂萃取法对胡芦巴叶中的黄酮组分进行富集制备，采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对其中的黄酮类化合物进行表征；同时考察FLFs对H2O2诱导的L02肝细胞应激损伤的保护作用，首先采用MTT法检测L02细胞活力；H2O2诱导L02细胞建立氧化应激损伤模型；试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)的泄漏量、还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)的活力；荧光染色法观察细胞凋亡情况；Western bolt法检测c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1, HO-1)等蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平。结合MS碎片离子信息，经数据库检索和人工解析，FLFs中含有以槲皮素和山柰酚为苷元的8种黄酮类化合物；活性研究发现，与H2O2处理组相比，3.125～25μg·mL-1的FLFs能够提高损伤后L02细胞存活率，并且能浓度依赖性地降低L02细胞中LDH泄漏量和MDA的含量，增强GSH、SOD和CAT等酶的活性；抑制JNK和ERK1/2蛋白磷酸化水平，促进Nrf2和HO-1蛋白水平。荧光染色结果显示，H2O2组细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光，FLFs组的蓝色荧光强度明显降低。FLFs对H2O2所致的L02细胞氧化损伤具有保护作用，作用机制与其激活MAPKs/Nrf2/HO-1信号通路从而增强细胞清除自由基能力和改善细胞凋亡2个方面因素有关，胡芦巴叶抗氧化作用与其中含有丰富的黄酮类化合物有关。

• 单位
  中国科学院西北高原生物研究所; 青海民族大学