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摘要
为了解黑龙江省犬细小病毒（CPV）的流行情况，本研究从黑龙江省哈尔滨市、双城市、鹤岗市和大庆市的宠物医院共收集了10份经胶体金拭子检测为CPV阳性的犬粪便样品，利用F81细胞进行病毒的分离，并对分离的病毒进行PCR、血凝性试验、病毒分型鉴定和VP2基因的遗传进化分析。结果显示，有8份处理后的病料样品接种猫肾细胞F81细胞后出现明显的CPE，其中有3株病毒的血凝（HA）效价可达1:512；经PCR鉴定结果表明分离出8株CPV，分别命名为CPV-CX-1（简写为CX-1）～CX-3、CX-5～CX-8、CX-10；病毒的分型鉴定结果显示，8个分离株中有1株为CPV-2b型、3株为CPV-2c型、4株为CPV-2a型；VP2基因的遗传进化分析结果显示，8株CPV分属于两大不同的分支，其中CX-2、CX-3株与CX-8株处于一大分支，亲缘关系较近，CX-1、CX-7株与CX-5、CX-6、CX-10株处于另一大分支，亲缘关系也较近。其中仅CX-8株与国内外分离株的亲缘关系相对较近，CX-1、CX-5、CX-6、CX-7、CX-10株均与CPV参考株亲缘关系较远。选取HA效价较高的4株CPV感染杂交幼犬进行动物回归试验，每天观察各犬的临床症状、测量体温并于攻毒后第7 d采肛门拭子，根据发病犬临床症状的严重程度确定迫杀各组犬的时间，并分别经PCR检测CPV在各组犬各脏器中的分布及粪便的排毒情况；根据动物回归试验结果，选取2株致病力较强的CX-3株和CX-5株感染犬的十二指肠和空肠组织病料样品，再次接种杂交幼犬，按照动物回归试验方法进行强毒鉴定试验。动物回归试验结果显示，4株CPV感染幼犬后，CX-3株和CX-5株感染的幼犬出现犬细小病毒病发病症状，且CPV在感染犬的心、肝脏、脾脏、肺脏、肠淋巴、十二指肠和空肠均能够复制且有通过粪便排毒的现象；强毒鉴定结果显示，接种CX-3、CX-5株的感染犬出现典型的CPV感染症状，表明这2株CPV为强毒。本研究为监测黑龙江地区CPV的遗传变异趋势及其疫苗的研制具有重要意义。
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