TRMT61A在肝癌细胞中的功能及其机制研究

作者：胡哲轩; 张欣; 沃璐璐; 李静池; 王娇; 周佽想; 赵倩^*

来源：上海交通大学学报 (医学版), 2022, 42(06): 742-750.

• N1-甲基腺苷甲基化修饰
• TRMT61A
• 肝细胞肝癌
• 细胞增殖
• 细胞凋亡

目的·探究N1-甲基腺苷(N1-methyladenosine,m1A)甲基转移酶催化亚基(tRNA methyltransferase 61 Homolog A,TRMT61A)对肝癌细胞功能的影响及其潜在机制。方法·通过生物信息学软件分析TCGA数据库中TRMT61A在肝细胞肝癌患者样本中的表达情况并绘制相关生存曲线。通过CRISPR-Cas9技术构建稳定敲低TRMT61A表达的肝癌细胞系Huh7细胞和HepG2细胞,通过蛋白质印记法(Western blotting)检测对照组和敲低组细胞TRMT61A蛋白水平;通过斑点印迹实验检测2组细胞总RNA的m1A修饰水平。利用CCK-8法和平板克隆形成实验检测2组细胞增殖能力。使用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色和流式细胞术检测细胞周期;通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白表达水平。使用Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;通过Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果·经生物信息学软件分析,TCGA数据库中TRMT61A在肝癌患者癌组织中高表达,通过绘制生存曲线发现TRMT61A与肝癌患者的预后呈负相关。在肝癌细胞系Huh7和HepG2中稳定敲低TRMT61A后,细胞中TRMT61A蛋白水平下降,总RNA的m1A修饰水平下降。CCK-8实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后细胞增殖明显受到抑制;平板克隆实验结果显示在Huh7和HepG2细胞中稳定敲低TRMT61A后,克隆形成数目显著降低。TRMT61A敲低的Huh7和HepG2细胞出现G0/G1期细胞周期阻滞,细胞中P21蛋白水平显著上升,cyclin D1蛋白水平下降。此外,细胞凋亡检测结果显示敲低TRMT61A后Huh7和HepG2细胞凋亡率上升,而细胞剪切活化caspase3蛋白水平也明显上升。结论·敲低TRMT61A可抑制肝癌细胞增殖,并诱导其发生凋亡。

• 单位
  上海交通大学; 中国医学科学院