小干扰RNA抑制胃癌细胞株葡萄糖调节蛋白Grp78的表达

作者：张新晨; 杨维良; 徐华锋; **全; 杨宝峰

来源：世界华人消化杂志, 2007, (05): 447-452.

DOI：10.3969/j.issn.1009-3079.2007.05.003

• 胃癌
• RNA干扰
• 葡萄糖调节蛋白
• 逆转录-聚合酶链反应
• 免疫荧光技术

目的:观察Grp78靶向RNA干扰质粒载体对人类胃癌细胞株7901 Grp78基因表达的抑制作用.方法:设计1对Grp78基因发卡寡核苷酸,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入人类胃癌细胞株7901内,分别在转染前、转染后24,48和72h通过RT-PCR、免疫荧光技术检测Grp78mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp78干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78.将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到Grp78mRNA及蛋白水平的表达明显下调,随着时间的延长Grp78在实验组中的表达逐渐降低,并随着时间推移稳定存在.阴性对照组,转染前组,转染12,48,72h组Grp78的mRNA相对表达量分别为1.069,0.972,0.662,0.408,0.420.转染后组较转染前组及阴性对照组分别具有显著性差异(P<0.01),转染前与阴性对照组无显著性差异(P>0.05).转染前后组免疫荧光表达结果统计学差异明显(P<0.001),其中转染后48h同转染后24h相比较Grp78蛋白表达明显减少(P<0.00714).结论:构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78mRNA及蛋白的表达.

• 单位
  哈尔滨医科大学; 哈尔滨医科大学附属第二医院; 黑龙江大学