构建干扰RhoA的短发夹RNA真核表达载体

作者：卢永清; 苏继荣; 董红霖; 李文龙; 武伟; 张治军; 杨涛; 李久池

来源：中国药物与临床, 2007, (05): 342-345.

• RhoA
• RNA干扰
• shRNA
• 质粒 RhoA
• RNA interference
• Short hairpin RNA
• Plasmid

目的利用pGenesil-1质粒构建针对RhoA的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法设计2个shRNA结构的互补DNA序列,经退火成双链,胶回收酶切pGenesil-1大片段,T4DNALigase连接酶切大片段和DNA序列,得到质粒pGenesil-1-RhoA1和pGenesil-1-RhoA2.转化感受态细胞DH5a,扩增,提取重组质粒进行酶切鉴定。结果成功构建靶向RhoA的shRNA重组质粒载体.酶切鉴定和测序分析重组质粒,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。结论表达靶向RhoA的shRNA表达框成功构建在重组质粒载体上。

• 单位
  山西医科大学第二医院