重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的表达

作者：张红飞; 李军锋; 户义; 张慧娜; 鲍春旸; 王凯娟; 周育森

来源：郑州大学学报(医学版), 2012, (04): 450-453.

• 腺病毒载体
• HBx基因
• 肝癌细胞 adenovirus vector
• HBx gene
• hepatoma cell

目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型。方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况。RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达。根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率。将病毒感染人肝癌HepG2细胞,48h后收集裂解细胞,Westernblot检测HBx蛋白的表达。结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功。将pAd...

• 单位
  军事医学科学院; 公共卫生学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 郑州大学