摘要
目的构建细粒棘球蚴SmadE(Echinococcos granulosus SmadE)基因的酵母双杂交真核表达载体,并检测其表达重组蛋白的毒性和自激活活性。方法以PCR技术获得EgSmadE基因片段,并克隆至酵母双杂交载体pGADT7及pGBKT7。应用PEG/LiAc法将重组载体导入Y2HGold酵母感受态细胞,利用固体培养基表型筛选对其毒性和自激活活性进行检测。结果扩增EgSmadE基因全长1 129bp,与酵母双杂交重组载体连接后获得pGADT7-EgSmadE和pGBKT7-EgSmadE,经PCR、限制性内切酶双酶切和测序均正确;连接产物转化酵母菌后经培养基表型鉴定与对照组菌落大小一致,表明重组载体表达产物对酵母菌无毒性;SD/-Trp和SD/-Leu培养基均有白色菌落生长,而SD/-Leu/X/A和SD/-Trp/X/A无菌落生长,表明重组载体表达产物对下游报告基因无自激活活性。结论成功构建酵母双杂交载体pGADT7-EgSmadE及pGBKT7-EgSmadE,可用于鉴定EgSmadE蛋白质,为宿主与棘球蚴相互作用的分子机制研究奠定基础。
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单位基础医学院; 新疆医科大学第一附属医院; 新疆医科大学