摘要
矮牵牛WRKY转录因子PH3参与液泡pH、膜系统传递和自交不育等多个生理性状的调控,但是背后机理尚不完全清楚,为了深入探究PH3的功能,本研究利用CRISPR/Cas9技术对PH3基因第三个外显子上的特异靶位点进行编辑。通过测序发现,T0代转基因苗PH3的一个等位基因单碱基插入,另一个等位基因5个碱基被敲除。蛋白序列比对分析发现,突变造成蛋白移码和翻译提前终止。通过荧光定量PCR分析发现,PH3下游已知的靶基因的表达水平均显著下降,证明CRISPR/Cas9编辑突变体构建成功。本研究获得的PH3突变体为今后进一步研究该基因的功能提供了重要的材料。
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