双水相萃取耦合硼酸亲和吸附分离纯化辣根过氧化物酶

作者：吴雅娇; 邢又元; 韩娟; 吴嘉聪; 李媛媛; 王赟

来源：食品科学, 2021, 1-13.

• 辣根过氧化物酶
• 纯化
• 双水相体系
• 亲和吸附
• 苯硼酸

本实验开发了一种结合两步双水相萃取和亲和吸附分离的新型集成化方法，用于从辣根中分离和纯化辣根过氧化物酶（HRP）。首先，将两步双水相萃取（ATPE）工艺用于糖和色素的分离，然后将“多价”苯硼酸亲和磁性石墨烯复合材料(d-PBA-GO@Fe3O4@PEI)用作进一步吸附分离，实现从杂质蛋白中选择性分离HRP。通过研究温敏聚合物17R4-盐双水相体系的液-液相平衡行为，以及9种模型化合物在双水相体系中的分配行为，最终确定17R4 （w=0.08）-(NH4)2SO4 （w= 0.132）双水相体系作为初步纯化的工艺体系。通过构建的集成化方法，成功地从辣根中分离出HRP，而对HRP的结构没有影响，HRP的比酶活和纯化因子分别达到28.93 U·mg-1和1.92。该方法具有优异的分离纯化性能，对植物糖蛋白的工业化生产具有良好的前景。

• 单位
  食品与生物工程学院; 江苏大学京江学院; 江苏大学; 化学化工学院