烟草香气相关基因CRISPR/Cas9编辑突变体库的构建

作者：曾婉俐; 梁岗; 高茜; 李元川; 许力; 蒋佳芮; 许永; 向海英^*

来源：广西植物, 2023, 1-15.

• 烟草
• CRISPR/Cas9
• 烟草香气
• 靶向编辑
• 脱靶编辑

为探究CRISPR/Cas9基因编辑技术构建烟草突变体库的可行性，该研究筛选了100个可能参与烟草香气代谢的基因，设计相应的100个sgRNA并构建了由100个CRISPR/Cas9编辑载体组成的质粒库，获得转基因材料后分析了载体的共转化率、靶向编辑效率和脱靶编辑情况。结果表明：（1）通过农杆菌介导100个sgRNA的共转化后，在172个阳性转化株中检测到了其中的77个sgRNA，共转化效率为77%;(2)在77个携带sgRNA的转基因后代中，69个sgRNA对目标基因进行了靶向编辑，编辑效率为89.9%;(3)脱靶位点测序检测发现，只有一个sgRNA在非目标靶位点产生了脱靶编辑，表明CRISPR/Cas9基因编辑技术在烟草中的脱靶概率非常低。综上所述，利用CRISPR/Cas9载体库共转化对烟草基因进行高通量靶向编辑以构建突变体库的方法是切实可行，且该方法有共转化效率高、编辑效率高和脱靶编辑概率低等特点。

• 单位
  中国科学院西双版纳热带植物园; 云南中烟工业有限责任公司技术中心; 云南农业大学