HL-60/IL-6体外热原检测方法学研究及对细胞治疗产品的适用性考查

作者：王冲; 徐琳; 华晓东

来源：天津药学, 2020, 32(02): 6-10.

• HL-60
• IL-6
• 热原检测
• 细胞治疗产品

目的:建立用于体外热原检测的HL-60/IL-6法,并对细胞治疗产品进行适用性考查。方法:以细菌内毒素为工具药物,对可能影响HL-60/IL-6法试验结果的不同细胞代次、孵育时间、细胞数量、显色时间及血清含量5种因素进行考查,优化最佳试验条件。选用人源间充质干细胞(MSC)、树突细胞(DC)、T淋巴细胞、嵌合抗原T细胞(CAR-T)治疗产品进行方法适用性研究。应用CD3-APC抗体及凋亡试剂盒检测T及CAR-T细胞对HL-60细胞的凋亡作用,更为直观地验证其干扰作用。结果:经优化的HL-60/IL-6法的试验条件为:10～25代细胞、共同孵育24 h、细胞数量为2×105个/孔,血清含量为2%。采用本法对细胞治疗产品进行检测,干扰试验的回收率均在50%～200%之间,热原物质检测结果均为未检出或阴性,与细菌内毒素动态显色方法结果均一致。流式细胞检测仪结果表明,与T及CAR-T细胞共同孵育24 h,对HL-60细胞无凋亡作用,不会对试验系统产生干扰。结论:HL-60/IL-6法检测敏感性高,结果重复性好,可应用于细胞治疗产品热原物质的检查。