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摘要
建立高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(high performance liquid chromatography-time of flight mass spectrometry, HPLC-Q-TOF MS)方法进行初产瘤牛下丘脑多肽组学研究。试验分2组,即热稳定处理组及对照组,分别取经过热稳定仪处理和未经处理的冻存脑组织分离下丘脑,进行组织匀浆、重悬、超滤,获得分子量小于10 kDa的多肽组分。多肽混合物经NanoHPLC进一步分离后进行Q-TOF MS/MS分析,获得的MS/MS质谱图经ProteinPilotTM数据库搜索软件对Precursor、Peptide、Uniprot及ibiss 4种数据库进行搜索比对。结果:通过搜索Uniprot数据库,样品稳定处理组34个蛋白质中有14个鉴定为神经肽编码前体蛋白,而在对照组56个蛋白质中仅有8个被鉴定为神经肽编码前体蛋白。对上述4种数据库进行搜索比对,共鉴定得到121种多肽。结论:经热稳定处理后的样品可有效减少蛋白质降解,从而提高低丰度内源性多肽的鉴定率;结合nanoHPLC-Q-TOF-MS/MS分析技术及ProteinPliotTM搜索软件,可批量鉴定下丘脑多肽组份,从而为乏情期初产瘤牛下丘脑多肽组学的研究奠定理论基础。
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