空肠弯曲菌β1,3-半乳糖基转移酶（CgtB）突变体的设计及活性鉴定

作者：邓梦雪; 杨秀怡; 龙云峰; 刘若兰; 刘行辉; 苏延停^*

来源：食品与生物技术学报, 2023, 42(06): 20-25.

• β1,3-半乳糖基转移酶
• N-乙酰半乳糖胺
• 原核表达
• O-GalNAc修饰

来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶（CgtB）主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸，在O-连接N-乙酰半乳糖胺（O-GalNAc）修饰后面添加一个半乳糖，目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具，CgtB蛋白质用于突变体设计。在基因水平删除N端30个氨基酸及C端的30个氨基酸得到Cgt1，将Cgt1构建在pMal-c5x表达质粒上并通过大肠杆菌进行原核表达。可溶性的Cgt1经过麦芽糖结合蛋白（MBP）亲和层析柱进行纯化并利用糖结合实验进行活性分析。结果显示，大肠杆菌体系可以成功表达可溶性重组Cgt1蛋白质，相对分子质量约为70 000，重组的Cgt1具备结合O-GalNAc修饰蛋白质的活性；针对不同的标准糖蛋白，Cgt1只识别含有O-GalNAc修饰的黏蛋白（mucin）；对于复杂的细胞样品，Cgt1可以特异性识别细胞内的O-GalNAc修饰。该研究开发的识别O-GalNAc修饰工具，为进一步研究O-GalNAc修饰的功能奠定了基础。

• 单位
  湖北科技学院; 基础医学院