猴血浆中抗腺相关病毒8中和抗体滴度检测方法的建立及初步确认

作者：陶泽萍; 曹艳容; 许波华; 周璐; 赵小平^*

来源：中国新药杂志, 2023, 32(16): 1622-1628.

• VGB-R04
• 中和抗体
• 细胞水平
• 方法学
• 验证

目的:建立一种基于细胞平台的高灵敏度、高效、稳定的猴血浆中抗腺相关病毒8(AAV8)中和抗体滴度的检测方法，并对该方法进行相关性能的初步确认。方法:在体外将等体积稀释后的猴血浆与AAV8-Luciferase孵育后，取混合液加入铺有HEK293细胞的96孔板中，孵育过夜以感染HEK293细胞；细胞裂解后加入萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂，使用酶标仪检测荧光信号(RLU),以评估血浆中抗AAV8中和抗体含量，继而得到相应的抗体滴度。该研究对检测方法的检测灵敏度(LOD)及滴度实验重复性、精密度、方法稳健性和样品稳定性等性能进行初步确认。结果:建立了高灵敏度、高效、稳定的细胞水平检测猴血浆中抗AAV8中和抗体滴度的方法并完成初步确认。该方法LOD值为10.36 ng·mL-1,滴度实验重复性、精密度及方法稳健性良好，阳性对照样品室温放置24 h、2℃～8℃放置24 h、经-65℃～-90℃/室温冻融6次均保持稳定。结论:经初步确认，该方法可以用于猴血浆中抗AAV8中和抗体滴度的分析检测，利于掌握药物治疗进程，及时调整治疗方案，对AAV8血清型基因治疗药物的研发及个体化治疗有一定提示作用。

• 单位
  化学化工学院; 上海工程技术大学