人巨细胞病毒Han株US12基因缺失株的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的复制

作者：卢颖; 马艳萍; 柳中洋; 王鸿雁; 齐莹; 韩丽英; 高爽; 郑博; 刘畅; 黄郁晶; 阮强

来源：中国医科大学学报, 2017, 46(06): 489-500.

• 巨细胞病毒
• US12
• 细菌人工染色体
• 生长曲线

目的构建人巨细胞病毒(HCMV)Han株US12基因缺失的BAC毒株,研究US12产物对HCMV Han株在人胚肺成纤维细胞(HELF)中复制的影响。方法以侧翼含有US12基因同源序列的PCR引物扩增卡那霉素抗性基因,电转至含有Han株BAC质粒的大肠杆菌DY380-Han-wt-BAC,PCR及DNA测序验证US12缺失的病毒序列。将缺失突变质粒Han-ΔUS12-BAC-P电转至HELF,获得感染性病毒颗粒Han-ΔUS12-BAC。以MOI为0.1的Han-ΔUS12-BAC毒株及Han-wt-BAC毒株感染HELF,TCID50法测定上清中病毒滴度,绘制病毒增殖曲线。结果成功构建了Han-ΔUS12-BAC克隆,转染HELF后成功获得感染性病毒。生长曲线实验结果表明,ΔUS12缺失和野生型毒株在HELF中复制增殖与扩散水平无明显差异。结论 US12为HCMV临床株Han在HELF中增殖和扩散过程中的非必需基因。

• 单位
  沈阳市妇婴医院; 锦州医科大学; 中国医科大学附属盛京医院; 基础医学院