HCBP6模拟磷酸化重组质粒的构建与亚细胞定位

作者：杨雪亮; 王雯; 吴文娟; 刘小静; 李卫敏; 叶峰; 成军; 蔺淑梅^*

来源：中国肝脏病杂志(电子版), 2022, 14(01): 27-33.

DOI：10.3969/j.issn.1674-7380.2022.01.005

• HCBP6
• 重组质粒
• 模拟磷酸化
• 亚细胞定位

目的 构建HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的绿色荧光蛋白重组质粒，明确其亚细胞定位。方法 以构建含有570 bp的HCBP6外显子基因的绿色荧光蛋白重组质粒为基础，应用快速定点突变技术构建HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒。将重组质粒测序并进行序列比对。利用jetPRIME转染体系将HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒转染至细胞中，应用Real-Time PCR技术检测目的基因mRNA的表达，应用Western blot技术检测目的基因蛋白表达，应用荧光显微镜观察HCBP6不同位点磷酸化质粒的亚细胞定位。结果 将测序的重组序列与目的基因进行比对，发现重组序列与目的基因完全一致，说明HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒构建成功。RealTime PCR和Western blot表明，与对照组相比，实验组高表达HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的基因。免疫荧光显微镜可见10Ala主要在细胞质表达，WT、10Asp、151Ala、151Asp主要在细胞核表达。结论 构建的HCBP6及HCBP6不同位点模拟磷酸化的重组质粒可成功转染细胞并在细胞中高表达，HCBP6不同位点磷酸化质粒亚细胞定位不同。

• 单位
  首都医科大学附属北京地坛医院; 天津市第五中心医院; 西安交通大学第一附属医院