分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)突变体N266D表达纯化及功能分析

作者：邱秀芹; 史崔颖; 孙洪芳; 王晓晓; 杜佳慧; 郭志刚^*; 刘松柏^*

来源：生物学杂志, 2021, 38(04): 34-48.

• FEN1
• 基因突变体
• 核酸酶活性
• 细胞增殖

人源分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)作为DNA复制及DNA修复过程中重要的参与者,在维护基因组稳定和完整性方面具有不可替代的作用。尽管FEN1在很多肿瘤细胞中的表达都发生异常,但FEN1基因体细胞突变或遗传突变事件在人体细胞中却很少发生,发表的文献报道较少。前期在白血病患者骨髓细胞中发现了FEN1基因的一种N266D杂合突变体,基于此,成功构建了FEN1-N266D在原核及真核中的表达重组质粒,纯化了原核FEN1-WT、FEN1-N266D蛋白;通过TAMRA标记的DNA底物,检测了FEN、GEN和EXO的3种酶活性,结果发现N266D突变体的FEN、GEN及EXO活性基本不变;RTCA方法检测发现N266D蛋白过表达使细胞增殖能力受到抑制。通过以上对FEN1突变体N266D蛋白的核酸酶活性及对细胞增殖能力影响的分析,为进一步探讨FEN1突变体N266D在肿瘤发生进展中的潜在功能奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 苏州卫生职业技术学院; 南京师范大学