稳定表达人TMPRSS2基因BHK细胞系的建立及其对新城疫弱毒增殖效率评价

作者：刘伟; 李梦娇; 郭佩东; 孙英杰; 仇旭升; 谭磊; 宋翠萍; 廖瑛; 孟春春^*; 丁铲^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(05): 594-600.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0095

• TMPRSS2
• 慢病毒包装
• BHK细胞
• 新城疫弱毒

为提高细胞培养系统中新城疫病毒的增殖效率,通过构建TMPRSS2过表达的BHK细胞系,探索其对新城疫弱毒增殖的影响。本研究将TMPRSS2基因克隆于噬菌体载体pHAGE中,构建重组质粒pHAGE-TMPRSS2。将重组质粒pHAGE-TMPRSS2以及辅助包装质粒psPAX2和pMD2G共转染至293T细胞并收集上清。将包装好的慢病毒感染BHK细胞,通过Blasticidin加入筛选和有限稀释法将单克隆细胞扩大培养。经RT-PCR和Western-blot鉴定,结果表明,TMPRSS2在BHK细胞中获得了稳定的高表达。接种新城疫弱毒后通过TCID50测定显示,TMPRSS2过表达BHK细胞系能支持较高水平的病毒增殖。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 动物科学学院; 福建农林大学