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摘要
背景 多发性骨髓瘤发病率长期居高不下，但目前关于磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路和M2巨噬细胞极化促进多发性骨髓瘤发生进展的研究较少。目的 探讨M2巨噬细胞在多发性骨髓瘤患者中的表达及PI3K/AKT信号通路促进M2巨噬细胞极化的机制研究。方法 选取2021年10月—2022年4月于桂林医学院附属医院血液内科确诊的多发性骨髓瘤患者48例为试验组，选取同期健康志愿者（血液内科骨髓移植健康供者）30名为对照组。取2组研究对象外周血并分离单个核细胞，流式细胞术检测M2巨噬细胞比例。采用细胞传代培养RPMI8226细胞，通过佛波酯分化培养单核巨噬细胞THP-1为巨噬细胞。根据实验需要将瘤细胞培养并采用siRNA转染沉默磷酸酶基因（PTEN）分成3组：空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组；收集以上3组细胞培养基上清液加入巨噬细胞共培养体系后分为4组：M0巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组。采用Western Blot实验检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的AKT、p-AKT、PI3K-p85、p-PI3K-p85蛋白表达水平。采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN实验组、siRNA对照组的MMP2、MMP9的mRNA表达水平。采用流式细胞术检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2巨噬细胞中特异性抗体CD163、CD206、F4/80表达水平。采用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤上清液共培养的M0巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN上清液组、siRNA上清液组M2巨噬细胞特异标志物精氨酸酶1(ARG-1)、白介素10(IL-10)的mRNA表达水平。结果 试验组M2巨噬细胞表达水平高于对照组（t=0.855,P<0.001）。Western Blot结果显示，3组多发性骨髓瘤细胞p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85蛋白表达水平比较，差异有统计学意义（F=11.795,P=0.008;F=24.579,P<0.001）；其中siRNA-PTEN实验组中p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85蛋白表达水平均高于空白组和siRNA对照组（P<0.05）。荧光定量PCR结果显示，3组多发性骨髓瘤细胞MMP2、MMP9的mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（F=63.777,P<0.001;F=31.007,P<0.001）；其中siRNA-PTEN实验组中MMP2、MMP9的m RNA表达水平均高于空白组和siRNA对照组（P<0.05）。流式细胞术结果显示，4组M2巨噬细胞特异性抗体CD163+F4/80、CD206+F4/80表达水平比较，差异有统计学意义（F=384.218,P<0.001;F=299.663,P<0.001）；其中siRNA-PTEN上清液组M2巨噬细胞特异性抗体CD163+F4/80、CD206+F4/80表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组（P<0.05）。荧光定量PCR结果显示，4组M2巨噬细胞特异标志物ARG-1、IL-10的mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（F=19.826,P<0.001;F=34.507,P<0.001）；其中siRNA-PTEN上清液组M2巨噬细胞特异标志物ARG-1、IL-10的m RNA表达水平高于瘤细胞上清液组和siRNA上清液组（P<0.05）。结论 多发性骨髓瘤患者中M2巨噬细胞表达上调，多发性骨髓瘤细胞可通过激活PI3K/AKT信号通路促进M2巨噬细胞极化，调控骨髓瘤细胞微环境。
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单位桂林医学院附属医院; 桂林医学院
