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摘要
探讨热毒宁注射液(Reduning Injection, RDN)对流感病毒A/PR/8(PR8)感染小鼠的保护作用，以及对人工合成的单链RNA(R837)诱发的炎症反应的影响。将雌性C57BL/6小鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline, PBS)组、PR8感染组、PR8感染后阳性对照药物奥司他韦(oseltamivir, OSV)治疗组(OSV,30 mg·kg-1)、PR8感染后RDN治疗组(RDN,1.5 mL·kg-1)。OSV治疗组和RDN治疗组分别灌胃和腹腔注射相应剂量药物，每天1次，连续给药7 d。每天记录小鼠体质量，连续16 d,制作小鼠体质量变化折线图，分析RDN对流感小鼠体质量的保护作用。用流式细胞术分析病毒感染后小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞群改变情况，并用PCR法检测各组小鼠肺组织中炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP-2)、干扰素诱导蛋白(IP-10)和白细胞介素10(IL-10)等mRNA的表达。将小鼠巨噬细胞系RAW264.7铺板，加入不同浓度RDN(150、300、600μg·mL-1),培养并观察24、48 h,用CCK-8法检测细胞的增殖情况。在RAW264.7和小鼠原代腹腔巨噬细胞培养体系中，加入R837刺激细胞，模拟病毒感染诱导的炎症反应，同时用RDN进行干预，qPCR和ELISA法检测相关细胞因子的表达情况。与模型组相比，RDN治疗组小鼠体质量下降得到了一定程度的保护(P<0.05)。RDN治疗组小鼠肺指数及肺脏中炎症因子IL-6和TNF-α、趋化因子MCP-1和MIP-2等显著低于模型组(P<0.05)。流式细胞术分析发现与模型组相比，RDN治疗组小鼠BALF中巨噬细胞比例明显减少(P<0.05),T细胞比例得到了显著恢复(P<0.001)。CCK-8细胞增殖实验中，150、300或600μg·mL-1的RDN对巨噬细胞的增殖无明显影响。在R837诱导的巨噬细胞炎症反应中，RDN能够显著降低细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1、IL-1β、IP-10、RANTES和IL-10的表达量。综上所述，RDN能够缓解流感小鼠的体质量降低，有效降低肺脏中炎症因子水平，并且降低炎症性巨噬细胞比例，提示RDN可能抑制流感小鼠体内过度的炎症细胞浸润和降低细胞因子风暴的形成、缓解流感病毒感染导致的T细胞耗竭，从而减少继发感染的发生，防止演变为重症感染。在体外实验中证实，RDN可降低炎症因子的表达。该研究阐明RDN可能通过降低体内巨噬细胞数量和抑制巨噬细胞的炎症反应来缓解细胞因子风暴的严重程度，从而保护流感病毒感染小鼠。
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