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摘要
运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,建立SAMHD1基因敲除的Huh7细胞系,并检测敲除SAMHD1基因后对人肝癌细胞Huh7细胞增殖的影响。针对SAMHD1基因作用的功能区域,设计靶向SAMHD1的小向导sg RNA (Small Guide RNA)。构建lentiCRISPRv2-SAMHD1-g RNA重组质粒转化后测序。筛选稳定敲除SAMHD1的稳定细胞系并测序鉴定。采用克隆形成实验分析基因SAMHD1敲除后肝癌细胞Huh7细胞的增殖能力。测序结果显示lentiCRISPRv2-SAMHD1-g RNA载体构建成功。Western blot结果和测序结果表明成功构建敲除SAMHD1的Huh7稳定细胞系。克隆形成实验结果表明,相对于Huh7-WT细胞,Huh7-KO SAMHD1的细胞增殖能力增强(P<0.01)。成功构建基于CRISPR/Cas9技术敲除SAMHD1基因的Huh7细胞系,SAMHD1的表达缺失促进肝癌细胞的增殖。
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