miRNA-100低表达间充质干细胞对急性髓细胞性白血病细胞增殖、凋亡的影响及机制

作者：缪华纬; 孔凡良; 蒋英俊; 王凤云

来源：山东医药, 2020, 60(20): 20-23.

• 间充质干细胞
• 急性髓细胞性白血病
• miRNA-100
• 细胞凋亡
• 骨形态发生蛋白4

目的观察miRNA-100低表达的间充质干细胞(MSC)对急性髓细胞性白血病细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其相关机制。方法 MSC分别感染miR-100-NC和miR-100-inhibitor慢病毒,与人白血病细胞株K562共培养3 d后获取K562细胞,分别分为对照组和低表达组;采用MTT实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting法检测细胞中的细胞周期蛋白细胞周期依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)和凋亡相关蛋白Bcl-2样蛋白x(Bax)、cleaved Caspase-3。筛选出感染miR-100-NC和miR-100-inhibitor慢病毒的MSC中差异表达最明显的生长因子为骨形态发生蛋白4(BMP4),采用ELISA法检测K562细胞培养液中的BMP4。将K562细胞分为对照组、低表达组和实验组,对照组细胞与感染miR-100-NC慢病毒的MSC共培养,低表达组和实验组细胞与感染miR-100-inhibitor慢病毒的MSC共培养,实验组共培养1 d后加入BMP抑制剂Noggin蛋白;培养2 d后收集K562细胞,采用MTT实验和平板克隆实验检测增殖能力,流式细胞术检测凋亡细胞,Western blotting法检测CDK4、Cyclin D1、Bax、cleaved Caspase-3。结果低表达组细胞转染72 h细胞增殖能力及克隆形成数均高于对照组(P均<0.05);低表达组Cyclin D1、CDK4相对表达量高于对照组(P均<0.05);低表达组细胞凋亡率及Bax、cleaved Caspase-3相对表达量低于对照组(P均<0.05);低表达组培养液中BMP4水平高于对照组(P <0.05)。加入Noggin后,实验组共培养72 h时细胞增殖能力、克隆形成数及CDK4、Cyclin D1相对表达量均低于低表达组,细胞凋亡率和Bax、cleaved Caspase-3相对表达量高于低表达组(P均<0.05)。结论 miR-100低表达的MSC可促进急性髓细胞性白血病细胞增殖、抑制其凋亡,可能是通过上调BMP4水平实现的。

• 单位
  合肥市第二人民医院