抗大鼠Nogo-A-Δ2特异性多克隆抗体的制备及鉴定

作者：霍景瑞; 王蕾; 田毅; 张国安; 孙文杰; 杨晓晖; 刘英富; 刘颖^*

来源：医学动物防制, 2022, 38(05): 448-451.

• 轴索过度生长抑制因子A-Δ2
• 蛋白纯化
• 特异性
• 抗体制备
• 鉴定

目的 制备特异性兔抗大鼠轴索过度生长抑制因子A(Nogo-A)氨基端序列aa1～172(Nogo-A-Δ2)抗体，并鉴定抗体特性。方法 利用原核表达系统获得Nogo-A-Δ2(NA2)蛋白，以NA2纯蛋白为抗原免疫大耳白兔，同时NA2偶联N-羟基琥珀酰亚胺活化后的琼脂糖凝胶，偶联NA2抗原的凝胶进行免疫后大鼠血清的纯化，获得兔抗NA2抗体；ELISA检测纯化抗体的效价，Western blotting分析抗体的特异性。结果 构建pET-24a-NA2表达载体，经大肠杆菌(Escherichia coli,E coli)原核表达及Ni柱亲和纯化得到用于免疫的NA2纯蛋白，免疫大耳白兔获得抗血清后，利用偶联NA2蛋白的琼脂糖亲和填料对免疫血清进行特异性亲和纯化，获得效价高(1∶1×106)、特异性好的兔抗大鼠NA2特异性抗体。结论 本研究成功制备了能够识别NA2结构域的特异性兔多抗。

• 单位
  沧州医学高等专科学校