猪伪狂犬病病毒变异株gE/gI/TK三基因缺失突变株的构建及纯化

作者：张宇; 刘芳; 田润博; 郑慧华; 赵宇; 徐朋丽; 韩昊莹; 张鸿鑫; 崔建涛; 陈红英^*

来源：中国兽医学报, 2020, 40(03): 476-482.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.06

• PRV
• 变异株
• 同源重组
• gE/gI/TK三基因缺失

根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)UL区基因序列(KJ789182)设计2对特异性引物,扩增PRV NY株TK基因两侧序列,克隆至pUC-19载体,然后绿色荧光蛋白标记基因,构建转移质粒pUC-TKLRE。用转移质粒pUC-TKLRE和PRV双基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI- DNA共转染ST细胞,通过蚀斑纯化,获得表达荧光蛋白的PRV三基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+。经PCR鉴定及测序,证实获得的三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+在TK基因上缺失了311 bp。该病毒与亲本株PRV NY在ST细胞上培养时,具有相似的生长曲线,但其体外生长动力学比亲本株弱;且对非靶标动物小鼠是安全的。结果表明,本试验釆用同源重组,同时结合蚀斑克隆纯化技术,成功构建了1株以目前PRV流行变异株为亲本株的gE/gI/TK三基因缺失病毒,为防控当前PRV变异毒株的疫情、根除PR提供技术支持。

• 单位
  河南农业大学