稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-InTM CHO细胞系的建立

作者：刘欢; 刘亭; 陆定艳; 孙莉; 何俊奇; 李勇军; 王永林; 孙佳; 席晓岚^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(02): 103-108.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009579

• 人细胞色素P450氧化还原酶(POR)
• 慢病毒
• TM CHO-POR细胞系" name="keyword">Flp-InTM CHO-POR细胞系

目的 建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-InTM CHO细胞系，为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法 构建POR重组慢病毒并感染Flp-InTM CHO细胞，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达，挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养，以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达，获得稳定表达POR的Flp-InTM CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-InTM CHO-POR细胞(Flp-InTM CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-InTM CHO细胞(Flp-InTM CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果 与感染阴性对照病毒的Flp-InTM CHO细胞相比，感染POR重组慢病毒的Flp-InTM CHO细胞MMC代谢活性升高，POR mRNA和蛋白的表达水平增加，说明获得了可稳定表达POR的Flp-InTM CHO-POR细胞。与Flp-InTM CHO细胞相比，Flp-InTM CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异，而Flp-InTM CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-InTM CHO-2C19细胞。结论 成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-InTM CHO-POR细胞系。

• 单位
  贵州医科大学