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摘要
为了获得预防牛病毒性腹泻病毒1型(bovine viral diarrhea virus 1,BVDV-1)感染的病毒样颗粒,扩增C-Erns-E1-E2编码区段并克隆至pFastBacDaul载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞与Bacmid重组获得Bacmid-BVDV-1,转染至Sf9细胞,获得重组杆状病毒Baculo-BVDV-1。利用免疫荧光试验、免疫印记、电镜观察确定目的蛋白表达和病毒样颗粒的组装。制备病毒样颗粒灭活抗原并辅以Montanide ISA-201佐剂免疫豚鼠,分别用中和抗体滴度测定和淋巴细胞增殖试验分析体液免疫和细胞免疫应答,然后用106 TCID50 BVDV-1型AV69株攻毒,评价病毒样颗粒的免疫保护效果。结果表明,构建的重组杆状病毒Baculo-BVDV-1感染Sf9细胞可高效表达BVDV结构蛋白并形成病毒样颗粒。病毒样颗粒免疫诱导豚鼠产生较高滴度(1︰144)的中和抗体并激活细胞免疫,降低了BVDV感染豚鼠血液中的病毒RNA水平。文中以昆虫细胞表达系统制备BVDV病毒样颗粒并评价其免疫原性,为进一步研制BVD病毒样颗粒疫苗奠定了基础。
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单位家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所
