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摘要
目的探讨组蛋白去乙酰化酶6特异性抑制剂Tubastatin A(TubA)减轻猪心肺复苏(CPR)后肾肠损伤的保护作用及其潜在机制。方法将25只健康雄性大白猪按照随机数字表法分为假手术(Sham)组(n=6)、CPR模型组(n=10)及TubA干预组(n=9)。经右心室电刺激诱导心搏骤停9 min后CPR 6 min制备猪CPR模型;Sham组动物仅进行插管通气、置管、麻醉监护等常规操作。TubA干预组于复苏成功后5 min经股静脉泵入TubA 4.5 mg/kg, 持续1 h;Sham组和CPR模型组泵入等量生理盐水。分别于制模前及复苏后1、2、4、24 h取静脉血, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和二胺氧化酶(DAO)血清水平。于复苏后24 h取左肾上极与回肠末端组织, 采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡程度, 并采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测受体相互作用蛋白3(RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(MLKL)的表达水平。结果与Sham组相比, CPR模型组和TubA干预组动物均在复苏后出现肾功能障碍与肠黏膜损伤, 表现为SCr、BUN、I-FABP和DAO的血清水平均明显增加;然而, 与CPR模型组相比, TubA干预组复苏后1 h起SCr与DAO、复苏后2 h起BUN、复苏后4 h起I-FABP的血清水平均显著降低〔1 h SCr(μmol/L):87±6比122±7, 1 h DAO(kU/L):8.1±1.2比10.3±0.8, 2 h BUN(mmol/L):12.3±1.2比14.7±1.3, 4 h I-FABP(ng/L):661±39比751±38, 均P<0.05〕。组织检测分析显示, 与Sham组相比, CPR模型组和TubA干预组动物均在复苏后24 h出现肾肠组织细胞凋亡与坏死性凋亡, 表现为细胞凋亡指数均明显升高, RIP3和MLKL蛋白表达均显著上调;然而, 与CPR模型组相比, TubA干预组复苏后24 h肾肠组织细胞凋亡指数均明显降低〔肾组织细胞凋亡指数:(21.4±4.6)%比(55.2±9.5)%, 肠组织细胞凋亡指数:(21.3±4.5)%比(50.9±7.0)%, 均P<0.05〕, RIP3和MLKL蛋白表达均显著下调〔肾组织:RIP3蛋白(RIP3/GAPDH)为1.11±0.07比1.39±0.17, MLKL蛋白(MLKL/GAPDH)为1.20±0.14比1.51±0.26;肠组织:RIP3蛋白(RIP3/GAPDH)为1.24±0.18比1.69±0.28, MLKL蛋白(MLKL/GAPDH)为1.38±0.15比1.80±0.26, 均P<0.05〕。结论 TubA具有减轻复苏后肾功能障碍与肠黏膜损伤的保护作用, 其机制可能与抑制细胞凋亡和坏死性凋亡有关。
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