细胞色素P4502E1稳定转染Flp-InTM CHO细胞模型的建立

作者：赵永龙; 郭玮钰; 龙昌兰; 陆定艳; 陈帅帅; 李勇军; 刘亭^*

来源：贵州医科大学学报, 2022, 47(12): 1390-1395.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2022.12.005

• 细胞色素P450家族2亚家族E成员1
• 稳定表达
• TM CHO细胞" name="keyword">Flp-InTM CHO细胞
• 蛋白免疫印迹法
• 实时荧光定量PCR
• 转染

目的 构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-InTM CHO细胞系，并进行药物相互作用筛选。方法 利用Lipofectamine?2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-InTM CHO细胞，采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达，采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果 与Flp-InTM CHO空质粒组比较，PCR结果显示Flp-InTM CHO-CYP2E1细胞分别在2 000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带；qRT-PCR和Western blot结果显示，Flp-InTM CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论 成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-InTM CHO细胞模型，且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

• 单位
  贵州医科大学