钼喋呤依赖型三亚基单加氧酶Kdh的表达纯化与结晶

作者：张子缘; 王蕾; 吴更^*

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 39(10): 4590-4595.

DOI：10.13417/j.gab.039.004590

• Kdh
• 分子克隆
• 蛋白纯化
• 结晶初筛

Kdh (Ketone dehydrogenase)是一种钼喋呤依赖型单加氧酶,由KdhL、KdhM、KdhS三个亚基组成,在节杆菌属细菌对芳香杂环类环境污染物尼古丁的吡啶降解途径中发挥重要作用。本研究通过分子克隆的手段构建pART2-KdhLMS重组表达载体,并在嗜烟碱节杆菌中诱导表达,使用Ni2+柱亲和层析和凝胶过滤层析的手段纯化重组蛋白,得到了纯度较高且稳定的KdhLMS三亚基复合物,利用悬滴扩散法对Kdh蛋白进行了结晶条件的筛选,成功获得可培养Kdh蛋白晶体的条件为0.2 mmol/L CH3COONH4,20%PEG3350,pH值7.1,14℃。为最终解析Kdh蛋白三维空间结构提供了条件,也为利用结构生物学方法阐释其催化芳香杂环羟基化反应机理奠定了基础,对于尼古丁代谢途径的相关研究具有重要的意义。

• 单位
  微生物代谢国家重点实验室; 上海交通大学; 生命科学技术学院