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摘要
常用的基因敲除技术无法应用于某些特殊激酶的研究，旨为在植物病原真菌中建立基于蛋白激酶人工改造的analog-sensitive蛋白激酶研究系统，为蛋白激酶的研究提供新的思路和方法。采用网站预测蛋白激酶的“守门员”残基，用载体回补法对其进行突变获得相应的类似物敏感型(analog-sensitive，as)突变体gpmk1-as与pmk1-as，并检测类似物敏感型蛋白激酶的功能及其对ATP类似物抑制剂1-NM-PP1的敏感性。结果显示，Gpmk1与Pmk1的守门员残基分别为Q103和Q104，此位点在多个代表性真菌中均十分保守；类似物敏感型突变体gpmk1-as的菌落生长速度与野生型PH-1一致，均快于Gpmk1敲除突变体，Pmk1-as能够产生与野生型Guy11一样成熟的黑化附着孢，而Pmk1敲除突变体无法产生；在5 μmol/L的1-NM-PP1条件下，gpmk1-as的菌落生长速度下降，但PH-1正常生长，在10 μmol/L的1-NM-PP条件下，pmk1-as无法形成附着孢，但Guy11可以形成成熟的黑化附着孢。结果表明，Gpmk1和Pmk1的类似物敏感型蛋白激酶均能行使正常的蛋白功能，却对ATP类似物抑制剂1-NM-PP1十分敏感。
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