本发明提供了一种用于体内自组装CAR-T的纳米递送系统及其制备方法和应用。该系统包含脂质膜和由所述脂质膜包裹的带有CAR的质粒;所述脂质膜包含DlinMC3、DOPE、Chol、PEG-DMG、DOTAP和DSPE-MTAS-NLS;所述用于体内自组装CAR-T的纳米递送系统的外表面修饰有DSPE-PEG-CD3。本发明利用此纳米递送系统在体内直接产生CAR-T细胞,为CAR-T疗法提供了一种新颖、便捷、通用的实施方案。