重组慢病毒载体pLKO-1-EGFP-puro的构建

作者：宋波; 韩志强; 吴少璞; 刘景伟; 蔡晓辉; 杨靖; 许予明

来源：郑州大学学报(医学版), 2010, 45(06): 926-928.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6825.2010.06.014

• 神经系统遗传病
• 慢病毒载体
• 绿色荧光蛋白
• 嘌呤霉素抗性

目的:构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标记及嘌呤霉素(puro)抗性的重组慢病毒载体。方法:改建慢病毒载体质粒pLKO-1-puro的多克隆位点(MCS),以质粒pEGFP-C3为模板扩增出CMV-EGFP并与pLKO-1-puro连接,形成重组的慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro,后者与包装质粒Δ8.2和包膜蛋白质粒VSV-G在293T细胞中进行包装,产生重组慢病毒颗粒,感染非洲绿猴肾细胞Vero细胞,观察GFP的表达。结果:成功改建了慢病毒载体质粒pLKO-1-puro并插入了CMV-EGFP,形成了新型慢病毒载体质粒pLKO-1-EGFP-puro。3质粒共转染293T细胞产生的重组慢病毒颗粒感染Vero细胞后高表达绿色荧光。结论:成功构建了高效的带GFP报告基因及嘌呤霉素抗性的慢病毒载体。

• 单位
  第一附属医院神经内科; 郑州大学