短发夹状RNA抑制缺氧诱导因子1α在前列腺癌细胞中的表达

作者：平浩; 邢念增; 陈晓春; 张军晖; 闫勇; 杨勇

来源：中华男科学杂志, 2008, 14(11): 993-997.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2008.11.025

• RNA干扰
• 短发夹状RNA
• 缺氧诱导因子1α
• 前列腺癌

目的:构建产生缺氧诱导因子1α(HIF-1α)特异性短发夹状RNA(shRNA)的载体并检测其抑制作用,探讨该技术在前列腺癌治疗中的应用前景。方法:设计、合成针对HIF-1α的特异性shRNA模板序列,将其插入含有U6启动子的psilencerTM2.1-U6载体中,得到shRNA表达载体psilencer-HIF,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞株PC-3M,应用绿色荧光蛋白质粒pEGFP共转染评价转染效率,RT-PCR及Western印迹检测其对HIF-1α表达的影响。结果:重组质粒psilencer-HIF经测序分析证实与设计的完全一致,共转染24 h后质粒转染效率为(89.26±4.72)%,其产生的shRNA在PC-3M细胞中能诱导RNA干扰(RNAi),转染后48 h HIF-1αmRNA和蛋白水平分别下降82.09%和81.61%(P<0.01);而阴性对照组HIF-1α表达水平无明显改变(P>0.05)。结论:成功构建了HIF-1α基因shRNA表达质粒,其可有效抑制前列腺癌细胞中的HIF-1α的表达,为前列腺癌的基因治疗提供了新思路。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院; 首都医科大学附属北京朝阳医院