乙型肝炎病毒C基因在毕赤酵母中的表达

作者：李朝霞; 梁敏坚; 李林; 胡波; 朱振宇

来源：中国病理生理杂志, 2004, 20(12): 163-167.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2004.12.037

• 肝炎核心抗原,乙型
• 免疫反应性
• 基因表达
• 毕赤酵母

目的研究乙肝病毒核心(C)基因在毕赤(Pichiapastoris)酵母中的表达,以期获得高效表达的具有良好免疫反应性和特异性的重组乙肝病毒核心蛋白(HBcAg)。方法采用PCR法从含HBV全基因序列的质粒pHBV1中扩增C基因,亚克隆到pGEM-T载体中,经DNA序列分析后将目的基因定向克隆到酵母表达载体pPIC9中,构建重组质粒pPIC9-cAg。然后用电转法将重组质粒转化入酵母菌GS115,05%甲醇诱导表达。采用SDS-PAGE、Westernblot和ELISA法对表达产物进行分析。结果限制性内切酶酶切和DNA序列分析证实HBVC基因已正确克隆到酵母表达载体pPIC9中;SDS-PAGE结果显示重组HBcAg在毕赤酵母细胞中表达;ELISA及Westernblot分析表明,表达产物具有良好的免疫反应性和特异性,重组HBcAg的滴度可达1∶12800。结论成功构建了pPIC9-cAg重组质粒,并在毕赤酵母中高效表达了具有良好免疫反应性和特异性的重组HBcAg,为进一步研制抗-HBc诊断试剂盒奠定了基础。

• 单位
  中山大学附属第三医院; 中山大学