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摘要
目的探讨脂多糖(LPS)建立内毒素血症小鼠模型中,LPS剂量和作用时间对肝脏胆汁酸转运体钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白(Ntcp)和胆盐输出泵(Bsep)mRNA表达,以及肝功能的影响。方法 128只雄性C57BL/6小鼠,腹腔注射LPS(剂量分别是5、10、20、40mg/kg),制作内毒素血症模型;并设生理盐水(NS)对照组、健康对照组;按给药后取材时间进一步分为24 h、48 h、72 h组,每组8只。留取小鼠血液样本测定血清TBIL、TBA、ALT、AST水平,留取肝脏标本,实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-qPCR)测胆汁酸转运体NtcpmRNA和Bsep mRNA表达量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化。各组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验进行统计。结果 (1)内毒素血症各组小鼠Ntop mRNA、Bsep mRNA相对表达量在2472h内下降,24h表达最低[LPS5、10、20、40mg/kg组Ntcp mRNA相对表达量分别为(0.64±0.02)、(0.53±0.14)、(0.25±0.09)、(0.15±0.07),Bsep mRNA相对表达量分别为(0.74±0.12)、(0.58±0.11)、(0.41±0.09)、(0.27±0.11)],并随着LPS剂量增加逐渐降低,24 h各组差异均有统计学意义(Ntcp mRNA、Bsep mRNA对应F=5.F=9.31,P=0.04、P=0.02)。(2)内毒素血症小鼠各组总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)较对照组均升高(P<0.05),24 h达峰值;其中40 mg/kg LPS处理后72h较24h均有显著降低,TBIL浓度为(1.29±0.25)μmol/L和(1.71±0.22)μmol/L,TBA浓度为(6.97±0.98)μmol/L和(8.96±1.01)μmol/L,ALT水平为(120.17±21.08)U/L和(179.22±16.57)U/L,AST水平为(360.34±35.31)U/L和(510.97±34.70)U/L,均P<0.05。(3)5、10 mg/kg LPS组小鼠24 h见肝组织疏松淡染,间质炎性细胞浸润,48 h及72 h见肝细胞嗜酸性变、空泡样变,炎性细胞浸润,胆小管增生;20、40 mg/kg LPS组小鼠各时间点均见肝组织结构改变,灶性坏死,间质炎症细胞浸润,胆小管增生、扩张。结论内毒素血症肝损伤模型24 h时即出现Ntcp mRNA和Bsep mRNA表达下调,且随LPS剂量增加而加重,可能是内毒素肝损伤的重要机制。
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