帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1的相互作用研究

作者：张佳; 陈旭^*

来源：中华老年心脑血管病杂志, 2020, 22(09): 979-982.

• 帕金森病
• 突触蛋白类
• 质粒
• 突触囊泡蛋白
• 转染

目的探讨帕金森病致病基因Parkin与突触相关蛋白synaptojanin1(SYJ-1)的关系。方法选择雄性8周龄野生型C57B/L小鼠5只,获取脑组织裂解物,分为阳性对照组、抗Parkin抗体组、抗SYJ-1抗体组和阴性对照组,阳性对照组不加任何抗体,后3组分别加入抗Parkin抗体、抗SYJ-1抗体、无效抗体处理,检测Parkin和SYJ-145表达。选择人胚肾细胞系(HEK-293T)细胞进行结构域鉴定实验,用免疫沉淀反应检测Parkin与SYJ-1共沉淀。检测构建Parkin不同结构域截短突变质粒。Pakrin对SYJ-1泛素化降解实验中,将HEK-293T细胞分为6组(n=5)转染:绿色荧光蛋白(GFP)-SYJ-145+HA-UB质粒组(A组)、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin组(B组)、GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-Parkin质粒组(C组)、MG132处理的GFP-SYJ-145+HA-UB+MG132质粒组(D组)、GFP-SYJ-145+Flag-Parkin+MG132质粒组(E组)和GFP-SYJ-145+HA-UB+Flag-Parkin+MG132质粒组(F组),检查GFP-SYJ145表达。结果阳性对照组有Parkin和SYJ-145表达,抗Parkin抗体组有SYJ-145表达,抗SYJ-1抗体组有Parkin表达,而阴性对照组无Parkin和SYJ-145表达。转染293T细胞能够表达构建的6种截短突变质粒Ubl,LINK,R0,R1,IBR,R2。免疫沉淀反应发现,IBR和R2结构域的缺失抑制Parkin与SYJ-1的共沉淀。C组GFP-SYJ-145表达明显低于A组、B组、D组、E组、F组(0.23±0.01 vs 0.52±0.01,0.55±0.02,0.62±0.01,0.60±0.01,0.48±0.01,P<0.01)。结论 SYJ-1为Parkin蛋白E3连接酶的一个新的底物,Parkin特异性的通过IBR和R2结构域直接结合SYJ-1,Parkin通过蛋白酶体途径促进SYJ-1降解。

• 单位
  上海市第八人民医院; 神经内科