罗非鱼SRA4基因重组表达、亚细胞定位及组织分布

作者：黄子威; 汪志文; 黎源; 夏洪丽; 简纪常; 鲁义善^*

来源：广东海洋大学学报, 2021, 41(05): 19-27.

DOI：10.3969/j.issn.1673-9159.2021.05.003

• 尼罗罗非鱼
• On-SRA4
• 重组表达
• RT-qPCR
• 亚细胞定位

【目的】研究尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）清道夫受体基因（On-SRA4）的重组表达、亚细胞定位及组织分布,为深入研究On-SRA4基因功能奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的On-SRA4基因序列设计克隆引物,构建原核表达载体并诱导重组蛋白rOn-SRA4的表达。同时,采用生物信息学、亚细胞定位手段分析On-SRA4的结构特征,用实时定量PCR分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肝、肠道、鳃、脑、肌肉、皮肤、血液的表达水平,用灭活无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）、病毒类似物PolyI:C刺激健康罗非鱼,分析On-SRA4在头肾、胸腺、脾脏、肠道的表达水平。【结果与结论】成功构建原核表达载体pET28a-OnSRA4,诱导获得目的蛋白rOn-SRA4,rOn-SRA4分子质量约80 ku。亚细胞定位显示,rOn-SRA4定位于细胞核与细胞质。组织定量分析表明,On-SRA4在所有组织中均有表达,且在血液中表达量最高,在灭活无乳链球菌与Poly I:C刺激后,健康罗非鱼胸腺、肠道、脾脏和头肾中On-SRA4表达量均显著升高,表明On-SRA4参与了病原引起的免疫反应,是罗非鱼抵抗病原的相关基因。

• 单位
  广东省水产经济动物病害控制重点实验室; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东海洋大学深圳研究院; 广东海洋大学