麒麟鸡Frizzled4基因的miRNA筛选及验证载体构建

作者：李珊珊; 张伟; 张权; 董晶; 李艳青; 杜炳旺

来源：中国家禽, 2016, 38(18): 9-13.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2016.18.003

• 麒麟鸡
• 卷羽
• Fzd4
• 双荧光素酶报告载体

研究利用生物信息学方法选出调控Fzd4基因的miRNAs,且利用q RT-PCR方法检测了卷羽麒麟鸡和片羽怀乡鸡中miRNAs和Fzd4基因表达水平,进一步构建了Fzd4基因双荧光素酶报告基因pmir Glo载体,为后期在细胞水平验证miRNA和Fzd4靶标关系提供条件。结果显示:Fzd4基因的CDS区存在miRNA-1458(mi R-1458)和miRNA-1623(mi R-1623)靶标结合位点,与经典的调控机制有所不同,其3′UTR存在miRNA-184-3p(mi R-184-3p)结合位点;相对于怀乡鸡,麒麟鸡皮肤中mi R-1458、mi R-1623和Fzd4基因表达水平极显著升高(P<0.01),而mi R-184-3p表达量极显著降低(P<0.01);构建了Fzd4基因双荧光素酶报告载体,为细胞水平研究其具体调控机制奠定基础。研究表明Fzd4基因的关键miRNA为mi R-184-3p以及Fzd4基因双荧光素酶报告载体的构建为进一步研究其在毛囊生长发育过程的作用奠定基础。

• 单位
  分子生物学国家重点实验室; 广东海洋大学; 中国农业科学院特产研究所