利用Red/ET重组技术构建表达非洲猪瘟病毒CP530R和F317L基因的重组伪狂犬病毒

作者：孔洁; 邵洋洋; 乔延召; 赵琪琪; 李鸿鑫; 张新珩; 蔺文成; 陈伟国; 谢青梅^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(09): 1716-1721.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.09.07

• 非洲猪瘟病毒
• CP530R
• F317L
• 伪狂犬病毒载体
• TK基因
• Red/ET重组技术

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染引起的一种高度接触型传染病,由于该病毒感染机制极为复杂,能够引起世界范围内的猪群发生致病性死亡。本研究参考Georgia 2007/1株(GenBank登录号:FR682468)的CP530R和F317L基因序列,人工合成PUC57-CMV-HA-CP530R-F317L-BGH质粒,利用Red/ET重组工程技术和ccdB反向筛选技术,将ASFV特定基因定向插入到伪狂犬病毒TK位点,构建重组毒株rBartha-K61-CP530R-F317L。结果表明,构建成功的感染性克隆在PK-15细胞上完成适应性传代并持续传至20代,PCR扩增得到正确基因条带,测序结果未发现缺失与插入。本研究将外源基因成功插入到pBeloBAC11-Bartha-K61载体上,重组伪狂犬病毒构建成功,为进一步研制新型ASF活载体疫苗奠定了基础。

• 单位
  华南农业大学