马泰勒虫棒状体颈部蛋白5基因的克隆与原核表达

作者：芦星; 王水怡; 陈林军; 刘明明; 刘雨桐; 朱慧茹; 姜冰冰; 杜少磊; 巴音查汗; 刘丹丹; 张伟^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2023, 41(04): 497-501.

• 马泰勒虫
• 棒状体颈部蛋白5
• 原核表达
• 抗原性

从马泰勒虫新疆分离株PCR扩增棒状体颈部蛋白5 (ron5)基因，构建pGEX-4T-ron5表达载体，转化至大肠埃希菌（E. coli） BL21 (DE3)进行原核表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物，以谷胱甘肽S-转移酶标签兔单抗（1∶2 000）和马泰勒虫感染马阳性血清（1∶100）作为一抗，以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG和兔抗马IgG (1∶5 000)为二抗进行蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析。马泰勒虫新疆分离株的ron5基因长1 434 bp，提交GenBank获得的登录号为OP777492。序列比对结果显示，马泰勒虫新疆分离株ron5的核苷酸和氨基酸序列与马泰勒虫WA株（GenBank登录号XM 004833657）的序列一致性最高，分别为99.6%和99.2%。系统进化树分析结果显示，马泰勒虫新疆分离株与马泰勒虫WA株聚在同一支上，二者亲缘关系最近。SDS-PAGE分析结果显示，异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导3 h时，RON5的表达量最高；RON5的相对分子质量（Mr）约为79 000，主要以包涵体形式表达。Western blotting分析结果显示，RON5可被谷胱甘肽S-转移酶标签抗体和马泰勒虫感染马血清识别，在Mr79 000处有明显条带。本研究克隆了ron5，表达的RON5具有较好的抗原性。

• 单位
  新疆农业大学