禾谷镰孢菌β-1，3-葡聚糖合酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立

作者：延扬帆; 张峰^*

来源：农药学学报, 2023, 1-13.

DOI：10.16801/j.issn.1008-7303.2023.0021

• 禾谷镰孢菌
• β-1，3-葡聚糖合成酶
• 催化亚基
• 昆虫细胞表达系统
• 去污剂

本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1，3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂，为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础。本研究通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法，得到适合禾谷镰孢菌β-1，3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达的载体和分离目的蛋白的方法。结果表明，载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中进行表达。其中GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺（dodecyldimethylamine oxide，DDAO）从细胞膜上分离，HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷（n-dodecyl-β-maltoside， DDM）、十烷基-β-D-麦芽糖苷（n-decyl-β-maltoside， DM）或DDAO从细胞膜上分离，GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离。本研究首次成功在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9表达系统中表达了β-1，3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2，FgRHO蛋白可促进FgGLS2的稳定表达，并筛选到适合GLS2提取的去污剂DDAO。

• 单位
  南京农业大学