利用酵母同源重组系统克隆肺炎克雷伯菌基因组岛

作者：易梅; 陈楠; 张杰; 贺新义; 蒋晓飞; 贾士儒; 邓子新; 秦广雍; 欧竑宇

来源：上海交通大学学报, 2009, 43(01): 9-14.

DOI：10.3321/j.issn:1006-2467.2009.01.003

• 基因组岛
• 酵母捕捉载体
• 重组克隆
• 肺炎克雷伯菌

利用酵母同源重组系统克隆耐药性条件致病菌肺炎克雷伯菌的基因组岛.具体方法为:对20株从临床中分离的肺炎克雷伯菌进行体外tRIP PCR扩增以搜索外源基因组岛;利用酵母同源重组系统构建作用于arg6 tRNA基因位点的酵母捕捉载体YCV6并克隆该位点的基因组岛.结果表明:在该20株肺炎克雷伯菌中,arg6 tRNA基因位点的tRIP PCR结果都是1.2 kb,没有筛选到大基因组岛插入;所构建的酵母捕捉载体YCV6携带了2个1.8 kb的靶序列,分别与肺炎克雷伯菌arg6 tRNA基因位点两侧的保守序列同源;将线性化的载体YCV6与肺炎克雷伯菌临床株HS04044的总DNA一起转入酵母细胞,利用酵母同源重组克隆临床菌株HS04044染色体上插入arg6位点的小基因组岛.该位点特异性的捕捉载体YCV6可用于克隆肺炎克雷伯菌临床株染色体插入arg6位点的外源DNA序列.

• 单位
  复旦大学附属华山医院; 天津科技大学; 生物工程学院; 上海交通大学; 郑州大学