Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因的克隆及表达

作者：王旭; 吴江; 杨弋; 王明宇; 车丽赫; 杨宇

来源：中华医学杂志, 2012, 92(1): 50-54.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2012.01.015

• 阿尔茨海默病
• 适体
• 核苷
• 融合基因

目的 将Aβ阻断肽(ABAD-DP) cDNA插入人硫氧化还原蛋白(hTRX)的活化位点,克隆融合基因TRX1-ABAD-DP-TRX2 (T-A-T) cDNA,为基因治疗阿尔茨海默病奠定基础.方法 通过PCR获得目的片段TRX1、TRX2、ABAD-DP,进一步将上述3目的片段按既定顺序插入腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV的多克隆位点,从而获得融合基因TRX1 -ABAD-DP-TRX2.经PEI介导Hela细胞包装重组腺相关病毒rAAV/T-A-T.感染NIH-3T3细胞,通过荧光免疫组织化学染色检测融合基因的表达及其与Aβ42的定位.结果 酶切后得到TRX1 -ABAD-DP-TRX2融合基因片段的大小约为435 bp,与理论值一致.荧光免疫组织化学染色检测到融合基因的表达,且共定位组T-A-T和Aβ42均位于NIH-3T3细胞胞质内.结论 成功克隆及表达了Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因,为进一步将阻断肽用于基因治疗阿尔茨海默病提供了基础.

• 单位
  神经内科; 吉林大学第一医院