重组人骨形态发生蛋白7成熟蛋白在悬浮CHO-S细胞中的稳定表达

作者：关诗宇; 刘涵; 郭凤祥; 宋昊; 邸丽莹; 徐军; 于爱东; 迟春萍; 时成波; 李利; 曹玉锋^*; 刘畅^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(05): 501-506.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003049

• 重组人骨形态发生蛋白7
• 定点突变
• 中国仓鼠卵巢细胞

目的在悬浮CHO-S细胞中稳定表达重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphgenetic protein7,rhBMP7)成熟蛋白。方法应用RT-PCR技术从BALB/c乳鼠股骨组织扩增mbmp7基因,克隆至质粒pMD18-T,通过定点突变3个氨基酸编码序列(G266S、S287N、D359E),得到重组克隆质粒pMD18-mbmp7m3;将mbmp7m3克隆至表达载体pCHO1. 0,构建重组表达质粒pCHO-mbmp7m3,转染CHO-S细胞,利用嘌呤霉素和甲氨蝶呤进行两轮加压筛选,有限稀释法筛选单克隆细胞,ELISA法检测rhBMP7成熟蛋白的表达。结果从乳鼠股骨组织扩增的cDNA经测序与GenBank中登录的序列完全一致,点突变后测序与设计完全一致。获得了稳定表达rhBMP7成熟蛋白的单克隆细胞株,最高表达量为202 ng/mL。结论成功利用改造的mbmp7基因在CHO-S细胞中表达了rhBMP7成熟蛋白,为后续该制品工艺开发及产业化奠定了基础。

• 单位
  珠海希望基因医药研究院有限公司; 长春生物制品研究所