基于Notch与Wnt/β-catenin通路探讨黄芪甲苷对人成纤维细胞间质转化的作用

作者：龚晓红; 李桓; 陆超群; 武上雯; 邢清桦; 李松伟^*

来源：中华中医药学刊, 2023, 1-20.

• 类风湿关节炎
• 间质性肺病
• 成纤维细胞
• 黄芪甲苷
• Notch信号通路
• Wnt/β-catenin信号通路

目的：基于Notch与Wnt/β-catenin通路，探讨黄芪甲苷（AS-IV）对类风湿关节炎相关间质性肺病（RA-ILD）体外模型的作用机制。方法：用Luminex检测法对RA-ILD模型鼠支气管肺泡灌洗液中细胞因子进行检测，筛选出关键细胞因子；共培养THP-1与NHLF两种细胞系，加入关键细胞因子模拟RA-ILD体外模型，给予不同干预措施。通过RT-PCR、Western blot、COIP、EdU、ELISA以及双荧光素酶报告基因活性检测方法观察Snail、ZEB-1及E-Cadherin的启动子活性及mRNA表达、Notch通路中的关键蛋白表达、β-catenin的核转位水平、NHLF细胞增殖速率、Col I、Col III及Fibronectin的分泌水平以及β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的相互作用。结果：使用细胞因子处理NHLF细胞后，Snail、ZEB-1的启动子活性及mRNA表达明显增高，Notch通路中的关键蛋白表达水平显著上调，β-catenin的核转位明显增加，EdU阳性细胞明显增加；细胞上清中Col I、Col III及Fibronectin分泌水平显著上调，同时β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的蛋白结合明显增加；使用Notch抑制剂DAPT和Jagged1 shRNA时结果与上述结论相反；AS-IV能够通过抑制Jagged1进而下调Notch及β-catenin信号通路的过度活化，抑制β-catenin与NICD、β-catenin与LEF、NICD与CSL的蛋白结合，能够剂量依赖性的抑制Snail及ZEB-1并上调E-Cadherin的启动子活性、mRNA和蛋白表达水平，抑制NHLF细胞的过度增殖及Col I、Col III、Fibronectin的分泌。结论：AS-IV可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路，抑制NHLF细胞增殖，减少ECM过度沉积，从而减缓RA-ILD肺间质纤维化进展。

• 单位
  河南省中医院; 河南中医药大学