RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定

作者：王海晶; 杨和平; 周向东

来源：第三军医大学学报, 2008, (01): 23-26.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2008.01.007

• CA916798
• RNA干扰
• 真核表达载体
• 构建
• 转染 CA916798
• RNA interference
• eukaryotic expression vector
• construction
• transfection

目的构建CA916798基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法以CA916798为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的CA916798基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。用脂质体2000将重组质粒转染A549/CDDP细胞并用G418筛选,MTT法测定药物敏感性并绘制细胞增殖曲线。结果构建针对CA916798的pRNAi-CA916798shRNA,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设...

• 单位
  第三军医大学西南医院