网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立

作者：邓小芸; 祁小乐; 高玉龙; 高宏雷; 秦立廷; 高立; 王永强; 王笑梅

来源：中国预防兽医学报, 2010, (09): 659-663.

• 网状内皮组织增生病
• 感染性分子克隆
• 病毒拯救 Reticuloendotheliosis
• infectious molecular clone
• virus rescue

为建立网状内皮组织增生病病毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HLJR0901的全基因组克隆于pBluescriptⅡ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的MscⅠ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901。测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284bp。将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV。...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 东北农业大学; 兽医生物技术国家重点实验室