番茄CRISPR/Cas9抗双生病毒系统的快速验证分析

作者：张琬琦; 刘超; 代培红; 李继洋; 雷建峰; 李月^*; 刘晓东^*

来源：分子植物育种, 2021, 19(10): 3290-3297.

DOI：10.13271/j.mpb.019.003290

• 番茄
• CRISPR/Cas9
• 双生病毒
• 抗病
• 复制起始蛋白

双生病毒是一类全世界范围内普遍存在的单链环状DNA病毒,其中菜豆金色花叶病毒属的病毒种类数量最多,危害最大。近年来,CRISPR/Cas9基因组编辑技术快速发展,已被用于植物抗病毒工程中。然而,CRISPR/Cas9系统中并不是所有的靶向序列都能成功完成基因组编辑,进而实现抗病毒的效果。本研究通过病毒基因组序列比对分析发现菜豆金色花叶病毒属各类病毒基因组上存在一个高度保守位点,位于复制起始蛋白(Rep)基因中。以该保守序列作为CRISPR/Cas9系统的靶序列,通过瞬时转化的方法,在本式烟草中快速验证该病毒靶序列的抗病毒效果。结果显示,本研究成功构建了针对双生病毒基因组的编辑系统,通过瞬时转化烟草后有效地抑制了病毒的积累,验证了该靶序列抗病毒的有效性,为后续基于CRISPR/Cas9基因组编辑技术在稳定转化番茄上实现对双生病毒的广谱抗性奠定基础。

• 单位
  新疆农业大学