解脲脲原体GrpE蛋白促进小鼠树突状细胞成熟并诱导Th1型免疫应答

作者：郭**; 唐艳红; 袁红霞; 张文君; 向璟; 刘鹏琴; 滕文友; 李冉辉; 代国知^*

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2022, 42(01): 41-49.

• 解脲脲原体
• GrpE
• 树突状细胞
• 免疫应答

目的探讨解脲脲原体GrpE蛋白(Ureaplasma urealyticum GrpE, Uu-GrpE)对树突状细胞成熟的影响及其对T细胞极化的作用。方法表达纯化Uu-GrpE蛋白并利用Western blot鉴定。分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 利用LDH试剂盒分析Uu-GrpE的细胞毒性, 流式细胞术检测Uu-GrpE对BMDCs表面共刺激分子CD80和CD86以及主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex Ⅱ, MHCⅡ)表达的影响, ELISA检测其刺激BMDCs后IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子的表达;磁珠分选同系异体小鼠的脾脏中初始CD4+T细胞(CD4+Na?ve T细胞), 通过构建BMDCs与Na?ve T细胞共培养体系分析Uu-GrpE刺激成熟的BMDCs(GrpE-BMDCs)对Na?ve T细胞增殖及极化的影响。GrpE-BMDCs经尾静脉注射免疫小鼠并利用ELISA和流式细胞术观察其所诱导的特异性体液和细胞免疫应答。结果成功表达Uu-GrpE并分离出高纯度BMDCs, Uu-GrpE可刺激BMDCs分泌IL-12p70、TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子且无细胞毒性;同时Uu-GrpE可显著增加BMDCs表面分子CD80[平均荧光强度(mean flourscence indensity, MFI):(324.00±22.11)vs (91.03±10.95), P<0.01]、CD86[MFI:(1 176.00±51.39)vs (217.00±14.93), P<0.01]和MHCⅡ[MFI:(708.70±56.32)vs (185.70±16.77), P<0.01]的表达;与单独GrpE-BMDCs组和GrpE(热变性)-BMDCs+T细胞组比较, GrpE-BMDCs不仅可刺激Na?ve T细胞增殖[刺激指数(stimulation index):(7.25±0.21), (6.55±0.23), (6.09±0.35), P均<0.05], 并且还诱导Na?ve T细胞分泌Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ [IL-2:(145.60±14.67) pg/ml, (55.92±3.12) pg/ml, (26.05±2.40) pg/ml, P<0.05和P<0.01;IFN-γ:(267.20±37.80) pg/ml, (146.70±20.65) pg/ml, (27.84±6.69) pg/ml, P均<0.05], 而Th2型细胞因子IL-4、IL-10和IL-5则无明显改变。与PBS组和PBS+BMDCs组比较, GrpE-BMDCs经过继转移后, 可诱导机体产生Th1型免疫应答。结论 Uu-GrpE蛋白明显促进BMDCs成熟及活化, 且进一步证明其作为解脲脲原体候选蛋白疫苗可诱导Th1型免疫应答。

• 单位
  呼吸疾病国家重点实验室; 郴州市第一人民医院; 南华大学; 广州医科大学; 怀化市第一人民医院